Vrste fluorescencijskih Mikroskopi
epifluorescentnim mikroskopi sjaj i prikupiti svjetlo kroz iste optike .
Dalekonajčešći fluorescentni mikroskop jekonfiguracija epifluorescentnim . U epifluorescentnim mikroskopom ,izvor svjetla - uobičajenoživa ili xenon žarulje - sja kroz filter koji odabire uski područje valnih duljina . Filtrira svjetlo na uzorku kroz mikroskop leća . Sunčevu svjetlost apsorbira fluoroforima - Molekularna naljepnice koje emitiraju svjetlost duže valne duljine kad upijaju svjetlost kraće valne duljine . Svjetlo iz fluoroforima , uz raspršene svjetlosti od izvora osvjetljenja , ide natrag u objektivom i na detektor ili oka . Usput , još filter blokira svjetlo rasvjete , tako da sve što je ostalo jefluorescentno svjetlo iz uzorka .
Confocal
epifluorescentnim mikroskopom prikuplja svjetlo posvuda u vidnom polju mikroskopa . Neki od svjetla uzbude apsorbira prije nego žarišnoj ravnini mikroskopom , neki u žarišnoj ravnini , a neki izvan žarišne ravnine . Zbogmikroskop prikuplja svu tu svjetlost ,slika će sadržavati oštru sliku svjetlo na fokus , ali to će također imati out-of - fokus svjetla iz drugih regija . Konfokalni mikroskop popravci da fokusiranjem laserski mjesto u istoj ravnini kao i mikroskop je usmjerena . Zatim ,pinhole ide ispred detektora , gdje ga blokira svesvjetlo koje ne dolazi od mikroskopa fokus . Skeniranjem uzorak ,čisto trodimenzionalna slika objekta može se dobiti .
Multiphoton Screenshot
U fluorescentnim mikroskopomsvjetlo dolazi od molekula unutar uzorka .
konfokalnoj mikroskopomporavnanje je vrlo osjetljiva . Akolaserska točka ,mikroskop cilj , prikupljanje optika ipinhole su off čak i najmanji iznosperformanse mikroskop pati . Multiphoton mikroskop dobiva oko ovog problema pomoću lasera valne duljine koji je samo pola kao energičan kao što treba da bude na uzbuđuju fluorofore u uzorku . Jedini način da Fluorofori će dobiti uzbuđen i emitiraju fluorescentne je akolaserske svjetlosti je dovoljno svijetla , tako da dvije čestice svjetlosti - fotoni - štrajk Fluorofor u vrlo kratkom vremenu . To se događa samo kadlaser je usmjerena na vrlo maleni licu mjesta . Dakle,jedino mjesto na uzorku koji će emitirati svjetlo je mjesto gdjelaser je usmjerena , koja drži sliku lijepo i čisto , jer ne postoji dodatna pozadinska svjetla riješiti - . Što znači da nema rupicom za poravnavanje
Total Internal Reflection Fluorescentna ( TIRF )
jedan uzorak može imati više fluorofore .
Još jedan način da se vrlo jasnih slika je kako bi bili sigurniZračenje ne dobiti vrlo daleko u uzorku . Akokap neurona , na primjer , nalazi se u kapi otopine na predmetno stakalce , a zatim neka od neurona se pridržavati na staklenoj površini . U ukupnom unutarnje refleksije fluorescencije ( TIRF ) mikroskopasvijetlo usmjereno bočno u stakalce , tako da se zapravo ne bi ga u otopinu drži stanice . No, neki od svjetlosti jedva curi u rješenje - samo jako blizu površine stakla . To znači da su samo mjesta koja će se emitirati svjetlo će se u vrlo tankom regiji točno nasuprot staklene površine . Za nešto poput neurona , gdje se jako puno zanimljivih stvari događa na površini stanica , ova tehnika može biti vrlo učinkovita
Super - Resolution
Svi mikroskopi . - uključujući fluorescencijskih mikroskopa - ograničene su fizike koji određuje širenje svjetlosti . Jedno od osnovnih pravila je da jefokusirana točka svjetlosti može dobiti samo tako mali - i ne manje. Za vidljive svjetlosti , koja veličina je oko 200 nanometara , ili 200/1000000000 dio metra . No, samohrani molekule su samo nekoliko nanometara u veličini , tako da ima puno zanimljivih značajki koje su ispod tog ograničenja koje , zovegranica difrakcije . Znanstvenici razvijaju " super - razlučivosti " tehnike ušuljati oko tog limita . Strukturirani osvjetljenje mikroskopija ( SIM ) i stimulira osiromašeni emisije ( inzistirao ) mikroskopija , na primjer , su i fluorescentne mikroskopije metode kojima se ograničava veličinu light- emitting licu mjesta od strane smanjuje veličinu uzbude svjetla licu mjesta .